05180nab a22005054a 4500 OSt 20260115115503.0 260115t V ||||oo||||a00| 0 S d Boletín de Malariología y Salud Ambiental 1690-4648 SAIAE Dr. Arnoldo Gabaldon VE48.1 SAIAE Dr. Arnoldo Gabaldon spa 20260113 Mayora Hernández, Nathaly Andrea Medina Pestana, Luis Gerardo Valor Páez, José Antonio Vera Bellafiore, Vanessa Karina Reyes Osorio, Jesús David Camacho García, Daría Elena Producción de plásmidos recombinantes para su uso como controles de la técnica RT-PCR para el diagnóstico de los virus Chikungunya y Zika Production of recombinant plasmids as controls of diagnosis technique (RT-PCR) of Chikungunya and Zika viruses Maracay S.A. Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon" 2020 Maracay Aragua VE 8p. fig. Digital ene.- jul. 2020 Boletín de Malariología y Salud Ambiental LX (1) 2020, 30-37 1690 - 4648 Consentimiento del autor para la reproducción total o parcial de su trabajo; siempre y cuando se indiquen la fuente 27 referencias El diagnóstico molecular de arbovirus es indispensable para identificar agentes etiológicos, particularmente en zonas endémicas para al menos uno de ellos. Estas deben ser validadas con controles positivos, los cuales están clásicamente representados por virus vivos, cuya obtención puede ser riesgosa, laboriosa y costosa. El objetivo de este estudio fue producir plásmidos recombinantes para su uso como controles positivos en la validación de la técnica RT-PCR para el diagnóstico de los virus Chikungunya (CHIKV) y Zika (ZIKV). A partir de los ARN extraídos de los virus [CHIKV (LARD809-GC) y ZIKV (MR766)] se obtuvieron por RT-PCR fragmentos parciales de ADN correspondientes a secuencias nucleotídicas de los genes E1 y NS5 de los virus Chikungunya y Zika, respectivamente, para serclonados en el plásmido comercial pGEM®-T Easy. La clonación se confirmó mediante PCR de colonias y PCR de ADN plasmídicos extraídos a partir de las colonias recombinantes. Se logró la producción de dos plásmidos recombinantes CHIKV-E1/pGEM®-T Easy y ZIKV-NS5192/pGEM®-T Easy con cada una de las secuencias especificadas, para su uso en la validación y control de las técnicas moleculares descritas en este reporte, para el diagnóstico de agentes virales CHIKV y ZIKV, evitando la manipulación de cultivos celulares y garantizando una fuente confiable de controles positivos(AU) The use of molecular techniques for the viral diagnosis requires the use of positive controls.Classically, the controls are live viruses, whose manipulation may be risky, laborious and expensive. The objective of this study was produced recombinant plasmids to obtain cloned sequences of Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV) virus for their use as controls in the specificdiagnostic by RT-PCR. DNA fragments were obtained fromRNA [CHIKV (LARD809-GC) and ZIKV (MR766)] using specific primers to amplify the nucleotide sequences from fragments of Envelope 1 protein (E1) of CHIKV and Non Structural 5 protein (NS5) of ZIKV genomes. The 548 bp (CHIKV) and 192 bp(ZIKV) bands were purified from agarose gel and ligations were performed with the cloning vector pGEM®-T Easy. The Escherichia coli XL1-Blue MRF` cells were transformed with the ligation mixture, the recombinant colonies were identified by colony PCR using the specific primers to the specific viral agent. One recombinant colony from CHIKV and six recombinant colonies from ZIKV were obtained from which plasmidic DNAs was extracted. The plasmidic DNAs were used as reaction controls in CHIKV and ZIKV RT-PCR, obtaining the characteristic bands. The cloning of the sequences was successful to produce the recombinant plasmids (CHIKV-E1/pGEM®-T Easy y ZIKV-NS5192/pGEM®-T Easy) to use in the validation of RT-PCR techniques(AU) VIRUS CHIKUNGUNYA/aislamiento y purificación VIRUS CHIKUNGUNYA/patogenicidad VIRUS ZIKA/inmunología VIRUS ZIKA/virología ADN RECOMBINANTE/genética ADN RECOMBINANTE/fisiología DIAGNÓSTICO PRUEBA DE ÁCIDO NUCLEICO PARA COVID-19 PRUEBA DE ÁCIDO NUCLEICO PARA COVID-19/métodos Ministerio del Poder Popular para la Salud Servicio Autónomo Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon" 9971 2950 Ministerio del Poder Popular para la Salud Maracay Servicio Autonomo Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon" 2020 Boletín de Malariología y Salud Ambiental Vol. 60 N° 1, 2020 1690-4648 BMSA Vol. 60 (1) 2020 Digital https://cainfo.iaes.edu.ve/cgi-bin/koha/opac-retrieve-file.pl?id=19a13b62816b75fb9335d7b46451512b Texto completo AC 0 9975 9975