000			05180nab a22005054a 4500
003			OSt
005			20260115115503.0
008			260115t V ||||oo||||a00| 0 S d
022			_2Boletín de Malariología y Salud Ambiental _a1690-4648
040			_aSAIAE Dr. Arnoldo Gabaldon VE48.1 _cSAIAE Dr. Arnoldo Gabaldon
041			_aspa
046			_j20260113
100			_aMayora Hernández, Nathaly Andrea
100			_aMedina Pestana, Luis Gerardo
100			_aValor Páez, José Antonio
100			_aVera Bellafiore, Vanessa Karina
100			_aReyes Osorio, Jesús David _d
100			_aCamacho García, Daría Elena
245			_aProducción de plásmidos recombinantes para su uso como controles de la técnica RT-PCR para el diagnóstico de los virus Chikungunya y Zika
250			_aProduction of recombinant plasmids as controls of diagnosis technique (RT-PCR) of Chikungunya and Zika viruses
260			_aMaracay _bS.A. Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon" _c2020
270			_bMaracay _cAragua _dVE
300			_a8p. _bfig.
338			_aDigital
362			_aene.- jul. 2020
490			_aBoletín de Malariología y Salud Ambiental _vLX (1) 2020, 30-37 _x1690 - 4648
500			_aConsentimiento del autor para la reproducción total o parcial de su trabajo; siempre y cuando se indiquen la fuente
504			_a27 referencias
520			_a El diagnóstico molecular de arbovirus es indispensable para identificar agentes etiológicos, particularmente en zonas endémicas para al menos uno de ellos. Estas deben ser validadas con controles positivos, los cuales están clásicamente representados por virus vivos, cuya obtención puede ser riesgosa, laboriosa y costosa. El objetivo de este estudio fue producir plásmidos recombinantes para su uso como controles positivos en la validación de la técnica RT-PCR para el diagnóstico de los virus Chikungunya (CHIKV) y Zika (ZIKV). A partir de los ARN extraídos de los virus [CHIKV (LARD809-GC) y ZIKV (MR766)] se obtuvieron por RT-PCR fragmentos parciales de ADN correspondientes a secuencias nucleotídicas de los genes E1 y NS5 de los virus Chikungunya y Zika, respectivamente, para serclonados en el plásmido comercial pGEM®-T Easy. La clonación se confirmó mediante PCR de colonias y PCR de ADN plasmídicos extraídos a partir de las colonias recombinantes. Se logró la producción de dos plásmidos recombinantes CHIKV-E1/pGEM®-T Easy y ZIKV-NS5192/pGEM®-T Easy con cada una de las secuencias especificadas, para su uso en la validación y control de las técnicas moleculares descritas en este reporte, para el diagnóstico de agentes virales CHIKV y ZIKV, evitando la manipulación de cultivos celulares y garantizando una fuente confiable de controles positivos(AU)
520			_aThe use of molecular techniques for the viral diagnosis requires the use of positive controls.Classically, the controls are live viruses, whose manipulation may be risky, laborious and expensive. The objective of this study was produced recombinant plasmids to obtain cloned sequences of Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV) virus for their use as controls in the specificdiagnostic by RT-PCR. DNA fragments were obtained fromRNA [CHIKV (LARD809-GC) and ZIKV (MR766)] using specific primers to amplify the nucleotide sequences from fragments of Envelope 1 protein (E1) of CHIKV and Non Structural 5 protein (NS5) of ZIKV genomes. The 548 bp (CHIKV) and 192 bp(ZIKV) bands were purified from agarose gel and ligations were performed with the cloning vector pGEM®-T Easy. The Escherichia coli XL1-Blue MRF` cells were transformed with the ligation mixture, the recombinant colonies were identified by colony PCR using the specific primers to the specific viral agent. One recombinant colony from CHIKV and six recombinant colonies from ZIKV were obtained from which plasmidic DNAs was extracted. The plasmidic DNAs were used as reaction controls in CHIKV and ZIKV RT-PCR, obtaining the characteristic bands. The cloning of the sequences was successful to produce the recombinant plasmids (CHIKV-E1/pGEM®-T Easy y ZIKV-NS5192/pGEM®-T Easy) to use in the validation of RT-PCR techniques(AU)
650			_aVIRUS CHIKUNGUNYA/aislamiento y purificación
650			_aVIRUS CHIKUNGUNYA/patogenicidad
650			_aVIRUS ZIKA/inmunología
650			_aVIRUS ZIKA/virología
650			_aADN RECOMBINANTE/genética
650			_aADN RECOMBINANTE/fisiología
650			_aDIAGNÓSTICO
650			_aPRUEBA DE ÁCIDO NUCLEICO PARA COVID-19
650			_aPRUEBA DE ÁCIDO NUCLEICO PARA COVID-19/métodos
710			_aMinisterio del Poder Popular para la Salud _bServicio Autónomo Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon"
773	0		_09971 _92950 _aMinisterio del Poder Popular para la Salud _dMaracay Servicio Autonomo Instituto de Altos Estudios "Dr. Arnoldo Gabaldon" 2020 _tBoletín de Malariología y Salud Ambiental Vol. 60 N° 1, 2020 _x1690-4648
852			_aBMSA Vol. 60 (1) 2020 Digital
856			_uhttps://cainfo.iaes.edu.ve/cgi-bin/koha/opac-retrieve-file.pl?id=19a13b62816b75fb9335d7b46451512b _yTexto completo
942			_cAC _n0
999			_c9975 _d9975